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产品名称:

猪圆形hiv病毒荧光PCR化学制剂盒

品牌产品编号: 服务日期: 2023-07-05
猪矩形艾滋病毒荧光PCR制剂盒的在选用可过大局限性的极大减少其他误差度,在选用时只需加入到DNA模板免费和引物既可,利于快捷键,能预防PCR实际操作步骤中的空气污染。含有含有高精确度度、高特喜欢的人、高稳定可靠性等优点和缺点。

产品概述

  猪圆环病毒荧光PCR试剂盒使用说明书
 
  【试剂盒简介】
 
  猪圆环病毒荧光PCR试剂盒,采用聚合酶链反应(PCR)技术检测猪血清和组织中的PCV,适用于PCV的检测、诊断和流行病学调查。
 
  【原理】
 
  提取DNA作为模板,在DNA聚合酶的作用下,经高温变性、低温退火和中温延伸的多次循环,使特异DNA片段的拷贝数放大数百万倍。将扩增的DNA片段进行电泳、染色后,在紫外灯下,肉眼可见DNA片段的扩增带。
 
  【试剂盒组份】

1. 生理盐水 20mL 8. 吸附柱和收集管 10套
2. 裂解液 6mL 9. 0.2 mL 薄壁PCR 管 15个
3. 洗涤液A 7mL 10. RT-PCR 反应液A 180μL
4. 洗涤液B 7mL 11. RT-PCR 反应液B 50μL
5. 洗脱液 500μL 12. 50 倍TAE 电泳缓冲液 20mL
6. 阴性对照 300μL 13. 染色液 10μL
7. 阳性对照 300μL    
 
 
  注:塑料袋内试剂(阳性对照、RT-PCR反应液A和B)-20 ℃冻存,裂解液2-8℃冷藏,其他室温保存。
 
  【操作方法】
 
  一、样品制备
 
  1样品采集:病死或扑杀的猪,取肺、扁桃体和脑等组织;待检活猪,用注射器取血5mL,2~8℃保存。(要求送检病料新鲜,严禁反复冻融。)
 
  2样品处理:
 
  2.1组织样品的处理:称取组织0.1g于研磨器中磨碎,再加1mL生理盐水继续磨至无块状物;然后将样品转至1.5mL灭菌离心管中,8000rpm离心2min,取100µL上清于1.5mL灭菌离心管中。
 
  2.2全血样品的处理:待血凝后取100µL血清于1.5mL灭菌离心管中。
 
  2.3阳性对照的处理:取阳性对照100µL于1.5mL灭菌离心管中。
 
  2.4阴性对照的处理:取阴性对照100µL于1.5mL灭菌离心管中。
 
  二、病毒RNA的提取
 
  1.取已处理的样品、阴性对照和阳性对照,分别加入450µL裂解液,充分颠倒混匀,室温静置3min。
 
  2.加入275µL无水乙醇,轻轻混匀。
 
  3.将混合液吸入吸附柱中(吸取液体时尽量不要吸到悬浮杂质,以免离心时堵塞吸附柱),10,000rpm离心1min,弃去收集管中液体,套回收集管。
 
  4.向吸附柱中加入500µL洗涤液A,10,000rpm离心1min,弃去收集管中液体,套回收集管。
 
  5.向吸附柱中加入500µL洗涤液B,10,000rpm离心1min,弃去收集管中液体,套回收集管。
 
  6.空柱10,000rpm离心2min。
 
  7.将吸附柱移入新的无RNA酶的1.5mL离心管中,在膜中央加入30µL洗脱液,室温静置2min,10,000rpm离心1min,获得总RNA。
 
  三、RT-PCR
 
  1.反应体系:分别取14µLRT-PCR反应液A(用前混匀)、4µLRT-PCR反应液B(用前混匀)和2µL模板RNA,混匀。
 
  2.反应程序:在PCR仪上运行以下程序:42℃45min,94℃3min;94℃30s、53℃30s、72℃30s,35个循环;72℃延伸10min。
 
  四、电泳
 
  1.制胶:用50倍稀释的TAE电泳缓冲液配制1%琼脂糖凝胶。
 
  2.电泳:待胶凝固后,取5µLPCR扩增产物点样于琼脂糖凝胶孔中,以5V/cm的电压于50倍稀释的TAE电泳缓冲液中电泳。
 
  3.染色:取50倍稀释的TAE电泳缓冲液30mL,加入10µL染色液,混匀后将胶浸泡30min,于紫外灯下观察结果。
 
  【结果判断】
 
  阳性对照出现494bp扩增带,阴性对照无带出现(引物带除外)时,实验结果成立。被检样品出现494bp扩增带为猪蓝耳病毒阳性,否则为阴性。
 
  【需用但未提供的材料】
 
  组织研磨器、眼科剪、眼科镊、一次性注射器、琼脂糖、经焦碳酸二乙酯(DEPC)处理的灭菌1.5mL离心管和吸头(10µL、200µL、1000µL)。
 
  【猪圆环病毒荧光PCR试剂盒注意事项】
 
  1.本试剂盒有效期为6个月,不要使用超过有效期限的试剂,试剂盒之间的组分不要混用。
 
  2.所有试剂应在规定的温度储存,使用时拿到室温下,使用后立即放回。
 
  3.注意防止试剂盒组分受污染。使用前将塑料袋内试剂瞬离15s,使液体全部沉于管底,放于冰盒中,吸取液体时移液器吸头尽量在液体表面层吸取。
 
  4.严格按试剂盒说明书操作可以获得的结果。操作过程中移液、定时等全部过程必须精确。
 
  5.RNA提取过程中,应戴口罩、勤换手套,尽量缩短操作时间。
 
  6.所有接触病料的物品均应合理处理,以免污染实验室。
 
 

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