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DNA转化成纯化化学试剂盒适于于一些物料

刷新时间日期: 2024-01-19
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DNA提取纯化试剂盒适用于各种材料,包括血清、血浆、脑脊液、尿液、粪便、培养细胞上清液等无细胞材料。
1、如果有N个样品,标记N+2个1.5-2mL螺旋盖塑料离心管,多出的一个为阳性对照,一个为阴性对照。为避免污染,建议不要使用压盖式塑料离心管。在每个管上做个标记,以在后续操作时区别向心面和离心面。然后在离心管中分别加0.2mL液体样品(血清、血浆、尿液、脑脊液、唾液、眼泪等),阳性对照和阴性对照。
1.1、如果是口腔拭子、咽喉拭子等各种拭子样品,则将拭子放入0.2mL自备生理盐水中挤压出液体,然后取0.2mL进行提取。
1.2、如果是粪便等半固定样品,则取约0.3mL的样品,加入0.3mL自备生理盐水。震荡重悬,离心取0.2mL上清进行提取。
1.3、如果血液,细胞培养液等含细胞的液体。可以离心用上清,也可以直接取 用,但后者提取的病毒DNA中会有少量细胞的基因组DNA污染(但不影响PCR)。血浆的抗凝剂必须是EDTA或ACD,不能是肝素。使用ACD时由于所加入ACD会增加体积,样品会被稀释。得到的病毒滴度会比使用EDTA低15%左右。血浆按0.6mL/管的量分装保存,以避免反复冻融。
1.4、如果样品是实体组织或培养细胞,则需要在自备生理盐水中匀浆后离心, 用0.2mL上清液(含病毒)进行提取,但此种情况下后得到的病毒DNA不可避免的会含有少量基因组DNA污染(但不影响PCR检测)。
1.5、如果液体样品中的病毒需要富集,可以使用1.5mL上述方法得到的液体在4℃24000g冷冻离心60分钟,移弃1.3mL、用剩下的0.2mL继续操作。
2、加入0.6mLDNA 病毒裂解液到各离心管中,振荡30秒混匀后室温放置10分钟裂解病毒。注意:DNA病毒裂解液在4℃放置后可能会产生沉淀,使用前必须放在 65℃水浴使沉淀溶解并充分摇匀后再取用。
3、加入0.8mL上柱结合液到离心管中,颠倒混匀后转移一半的混合液(0.8mL) 到离心吸附柱中,室温放置2分钟。
4、12000rpm室温离心1分钟,弃收集管中的穿透液,把离心吸附柱放回到收集 管中。
5、将剩余的另外一半裂解液(0.8mL)转移到离心吸附柱中,室温放置2分钟。
6、12000rpm 室温离心1分钟,弃收集管中的穿透液,把离心吸附柱放回到收集 管中。
7、加入0.7mL通用洗柱液到离心吸附柱中。12000rmp室温离心1分钟。弃收集管中的穿透液,把离心吸附柱放回到收集管中。
8、加入0.3mL通用洗柱液到离心吸附柱中。12000rmp室温离心1分钟。弃收集管中的穿透液,把离心吸附柱放回到收集管中。此为第二次洗涤,可以跳过。
9、12000rpm室温离心1分钟(干甩),弃含穿透液的离心管。
10、将干甩后的离心吸附柱套入到一个自备的RNase-free的1.5mL离心管中。在离心吸附柱的滤膜的中部加入30-100uL DNA洗脱液3.0,然后室温放置2分钟。
11、12000rpm室温离心1分钟,离心管中的溶液即为病毒DNA溶液。
12、DNA样品可以直接用于PCR,也可放-20℃长期保存。 
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